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BigStitcher › 点扩散函数

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概述

对于反曲面,需要为每个要反曲面的图像提供点扩散函数(PSF)。理想的PSF应该代表小于光学装置极限的点发射器如何通过显微镜学分析。

PSF 可以从理论计算,但是需要对显微镜进行精确的建模,因此更常见的是使用亚柔性荧光珠的图像来估计 PSF。由于使用荧光珠进行多视图配准很常见,因此您的数据中可能已经有了 PSF 源。

将 PSF 分配给图像和管理 PSF 的功能可以在ProcessingPoint Spread Functions下的右键菜单中的多视图模式中找到。 BigStitcher Psf menu

PSF 管理

提取 PSF

提取 PSF 是获取先前的 detected interest points 并完成 PSF 的过程。单击创建此菜单项将弹出 PSF 提取对话框: BigStitcher Psf extraction 在这里,您有几个选择:

  • 兴趣点:用于创建PSF的兴趣点。
  • 使用相应的兴趣点:选中该项目只能在另一个具有对应关系的兴趣点的图像中使用。只有当您已经使用这些点执行了 registration 时,此方法才有效。这对于快速提示意向检测很有用,但为了获得最佳结果,您可能需要manually curate a set of points that only consists of beads
  • 从PSF中删除强度投影:选中此选项可从生成的平均PSF中最小强度投影(在x、y和z中三次)。这应该可以减少背景最小删除噪音。
  • PSF大小:围绕PSF生成的兴趣点进行剪切的体积(以原始图像像素为单位)。默认值通常适用于合理采样的图像,但如果有过采样,您可能需要增加大小。

单击 确定 将选定的兴趣点转换为 PSF。这将为所有选定的视图生成单个 PSF(每个视图中的兴趣点将被平均)。

We will save the extracted PSFs as TIFF files in your project directory once you click Save in the main window. This is necessary for subsequent steps such as deconvolution, so make sure to save.

分配 PSF

分配PSF子菜单包含将现有PSF分配给选定图像的功能。它包含一个从视图分配边界,允许您快速将一个视图的PSF分配给所有选定的视图。

它还包含一个允许 高级… 选项,更灵活地重新分配和从文件加载外部 PSF。单击此按钮将弹出以下对话框: BigStitcher Psf assignment advanced 这里的选项是:

  • 将现有 PSF 分配给所有选定的视图:选择此选项后,系统将要求您在下一步中提供一个视图。该视图中的 PSF 将分配给所有选定的视图(与菜单中的快速相同分配)。
  • 将新的 PSF 分配给所有选定的视图:选择此选项后,下一步将要求您提供 PSF 文件。该文件中的 PSF 将分配给所有选定的视图。PSF 文件必须是具有奇数尺寸的 3D TIFF 堆栈,并且 PSF 的中心位于图像的中心。
  • 从其他通道的重复PSF:此选项后,系统会要求您提供源通道和目标通道。对于目标通道的所有选定视图,我们根据通道中的相应视图分配PSF。
  • 其他时间点的重复PSF:选择此选项后,系统会要求您输入时间点。对于所有选定的视图,我们将在选定的时间点选择相应的视图并复制该视图的PSF。

平均 PSF

您可以使用此子菜单将选定视图的各个 PSF 替换为平均 PSF,或者仅显示平均 PSF。 可用的选项有:

  • 仅显示:将所选视图的平均 PSF 显示为 ImageJ 图像。
  • 仅显示(删除最小投影):将选定视图的平均PSF显示为ImageJ图像,从图层中减少最小投影强度(见下文)。
  • 分配给所有输入视图:对所有选定视图的PSF进行平均,将平均PSF分配给所有视图。
  • 分配给所有输入视图(删除最小投影):对所有选定视图的 PSF 进行平均,把平均 PSF 分配给所有视图,从桌面中减少最小强度投影(见高度)。
  • 显示并分配给所有输入视图:对所有选定视图的PSF进行平均,把平均PSF分配给所有视图,并在ImageJ中显示生成的PSF。
  • 显示并分配给所有输入视图(删除最小投影):平均所有选定视图的 PSF 放置平均 PSF 分配给所有视图,从图纸中减少最小投影强度(见下文)。还可以在 ImageJ 中显示生成的 PSF。

显示 PSF

您可以使用此子菜单中的功能将 PSF 快速显示为 ImageJ 图像。可用的选项有:

  • 每个视图的原始PSF:显示每个选定视图的原始PSF。
  • 平均PSF:显示所有选定视图的平均PSF。
  • 平均变换PSF:显示所有选定视图的平均PSF,其中各个PSF根据视图的变换注册为世界坐标。
  • 平均PSF的最大投影:显示所有选定视图的平均PSF的最大强度投影。请注意,投影将沿着沿着PSF的最小(px)轴完成。
  • 平均变换 PSF 的最大投影:显示根据视图注册变换为世界坐标的平均 PSF 的最大强度投影。

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