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MTrack

重要

该插件现在被废弃,并被 Napari 插件取代,该插件计算来自微管和肌动表情 Kymograph 的动态不稳定性参数。 Napari plugin:在此插件中,用户输入微管的 kymographs,然后使用 UNET 模型来分割 kymograph 边缘,并且此 Napari 插件计算动态不稳定性参数。参见§§5§§§

MTrack 插件是几个名称和功能非常相似但互不相关的插件之一:

  • Mtrack2(约 2009 年)是一个用于随时间在 2D 中跟踪对象的插件。
  • MTrackJ 是一个 ImageScience 插件,用于促进运动跟踪和分析。
  • MTrack(约 2018 年)是一个用于检测、跟踪和测量 TIRF 图像中微管的插件。
  • TrackMate 是您日常跟踪的好帮手。

MTrack是一种工具,可检测、跟踪和测量通过TIRF(全内反射荧光)显微镜成像的荧光标记微管的行为。在这种种子体外重建方法中,稳定的非动态微管充当动态生长微管的成核点。

MTrack 检测微管种子,跟踪微管终止的生长并创建报表。

要在信噪比非常低的电影上使用 MTrack,您应该创建一个用于分割的去噪图像,并将其与原始电影一起上传。在此设置中,微管像素是从分割影片中识别的,而实际测量始终在原始影片上进行。

安装

1.单击PluginsTrackingMTrack。 2.点击管理更新站点按钮。

  1. 在列表中选择MTrack 更新站点。
  2. 单击关闭,然后单击应用更改。 5.重启斐济。
  3. 使用HelpUpdate…启动插件。

满足

微管检测和跟踪

典型的数据集由非动态微管种子的单个二维 (2d) 图像和动态生长微管的 2d 延迟图像组成。文件格式可以是 Fiji/Bioformats 的任何格式(.tif、.nd2、…)。要运行跟踪器,请选择PluginsMTrackMicrotubule Detection and Tracking

欢迎面板将打开。 Welcomea

选择模式

对于第一次分析,我们建议使用简单模式,在该模式中预先选择了许多参数。如果您对跟踪结果不满意,可以使用advanced mode(MTrack)参数设置。当分析多部影片时,可以选择batch mode(MTrack)并同时运行多部影片。但是,在批处理模式运行程序中,您必须至少以简单或高级模式运行一次程序之前,以选择并保存所需的您的参数。

以下介绍的是简单模式。

选择电影

接下来,用户选择电影。要上传的电影是从胎儿中出来的原始电影。在简单模式下,程序默认会进行伪平场校正。该补偿后的影片将仅用于种子的对象识别,而不用于终端检测。终端检测将始终在原始图像上执行。

在高级模式下,用户选择执行平场校正并应用可以选择半径的中值滤波器。或者,用户可以上传自己负担的电影。(阅读有关Preprocessing(MTrack)的更多信息)。

对于电影类型,请选择三个支持的选项之一:

  • 双通道图像作为超堆栈(两个通道都在一张图像中)
  • 连接种子图像和延迟图像
  • 单通道延迟图

请选择输出文件目录。仪表文件将写入为.txt文件。默认情况下,仪表影片的名称保存在当前工作目录中。

团队参数

该程序自动读取显示为像素大小(x 和 y 为微米)和帧速率(以秒为单位)的元数据。如果无法正确读取元数据,用户可以手动添加值。另外,用户还需要以像素为单位输入显微镜点扩散函数(PSF)的西格玛(X)和西格玛(Y)(参见此处的more explanation)。

当您输入任何参数时,请确保仅使用十舞蹈数字格式。

按“下一步”继续。将打开三个屏幕和一个面板。它们显示原始影片、删除影片和“活动图像”,“活动图像”代表种子,通常是影片的第一帧。每个成功识别的种子种子都会标有红色圆圈。

MSER 参数

将种子识别为对象的默认算法称为最大极值区域 (MSER)1。了解有关§§4§§§的更多信息。如果单个种子识别或两个非常接近的被识别为一个,用户可使用可调整的更改可以更改 MSER 参数。效果将实时显示在“活动图像”上。将大多数种子正确识别为对象后,单击“更换端点”以亚节点精度检测每个种子的下一步。

端点将显示为绿色表单。面板上会出现一个“下一步”按钮,允许用户翻到下一个面板。 Msersimple

选项

在开始实际跟踪微管的动态生长之前,该程序将为您提供几个选项: Options 取消选择并选择结束 如果错误地识别了某个终止,用户可以通过在图像中左键单击该终止来取消该选择终止。程序将记住并允许通过单击 Shift + 左键单击重新选择此终止(粉红色商品将标记终止)。如果未识别终端,请使用 Shift + Alt + 左键单击将选择用户定义的终端(橙色商品标记终端)。阅读更多有关microtubule polarity and (+) end vs. (-) end tracking的内容。

选择时间

用户可以通过输入帧编号来选择执行跟踪的开始时间和结束时间。单击“确认结束并跟踪”即可执行实际跟踪,该跟踪将“实时”执行(将显示详细条)。

黄色十字标记要跟踪的种子,红色标记不会被跟踪的种子。绿色寄语标记要跟踪每个的结束。橙色寄语结束标记将被跟踪的用户定义的完成。跟踪期间,黄色十字准线将显示标记微管上跟踪的当前位置。“成功”框将使您知道跟踪。将显示两部影片,“轨道 ID”影片(可用于将轨迹链接到各个微管)和“叠加”每个端的轨迹分别保存为.txt文件,并根据报表ID编号。每个端的轨迹将包含以下信息:帧号、微管总长度(以px和μm为单位)、轨道ID、x和y位置(px和μm)以及相对于前一帧的长度增量(px和μm)。成功跟踪后,用户可以选择保存的端部,后续电影可以以批处理模式(再次)运行。

引文

请注意,MTrack可通过斐济获取,并且基于书籍。如果您成功推动其用于您的研究,请引用我们的工作:

doi:10.1038/s41598-018-37767-1

参考文献